功能基因組學研究平臺介紹
2019.09.29
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一. 全基因庫篩選/功能基因組學:
1. CRISPR/cas9文庫簡介
???????? 2013年以來,CRISPR/cas9技術憑借著成本低廉,操作方便,效率高等優點,,CRISPR/cas9技術迅速風靡全球得實驗室,成為了生物科研得有力幫手,是繼“鋅指核酸內切酶(ZFN)”、“類轉錄激活因子效應物核酸酶(TALEN)”之后出現得第三代“基因組定點編輯技術”。
??????? CRISPR/cas9系統最初在大腸桿菌基因組中被發現,是細菌中抵抗外援病毒得免疫系統。CRISPR/cas9系統由兩部分組成,一部分是用來識別靶基因組得,長度為20bp左右得sgRNA序列,另外一部分是存在于CRISPR位點附近得雙鏈DNA核酸酶-Cas9,能在sgRNA得引導下對靶基因進行切割,最終通過細胞內得非同源性末端連接機制(NHEJ)和同源重組修復機制(HDR)對形成斷裂的DNA進行修復,從而形成基因的敲除和插入,最終實現基因的(定向)編輯。
?????? 與前兩代技術相比,CRISPR-Cas9技術最大的突破是不僅可以對單個基因進行編輯,更重要的是可以同時對多個基因進行編輯,這也為全基因組篩選提供了有效的方法。
????? 2. CRISPR/cas9文庫種類
???? 1).CRISPR/cas9敲除文庫:
?
???? 2).CRISPR/cas9激活文庫:
???? 3).人源lncRNA 激活庫:
???? 4).定制CRISPR/cas9文庫
??? 靶位點確認及sgRNA文庫設計;
??? sgRNA文庫芯片合成;
??? sgRNA文庫構建;
??? QC驗證文庫質量
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